پاسخ به:مقالات امور دام و آبزیان
پنج شنبه 8 تیر 1391 11:31 PM
| 14 : پژوهش و سازندگي تابستان 1386; 20(2 (پي آيند 75) در امور دام و آبزيان):96-101. |
| كلونينگ ژن F ويروس بيماري نيوكاسل در باكتري Escherichia.coli |
| شهرياري احمدي فرج اله,باسامي محمدرضا,مرعشي سيدحسن,موسوي سيدعليرضا* |
| * دانشكده كشاورزي، دانشگاه ايلام |
|
بيماري ويروسي نيوكاسل از مهمترين بيماري هاي طيور مي باشد كه ساليانه خسارات زيادي ايجاد مي نمايد. با توسعه مهندسي ژنتيك، امروزه از گياهان براي توليد واكسنهاي انساني و دامي استفاده مي شود. ژنهاي فيوژن (F) و هماگلوتنين نورآمينيداز (HN) ژن هايي اين ويروس هستند كه در عفونت زايي و بيماريزايي اهميت دارند. در اولين اقدام براي كلونينگ اين ژن در باكتري E.coli، ژن F از طريق استخراج RNA از سويه B1 اين ويروس جداسازي، و cDNA آن ساخته شد و سپس توسط واكنش PCR تكثير گرديد. جهت تاييد اختصاصي بودن محصول PCR، از هضم آنزيمي توسط آنزيم هاي EcoRI و SacI استفاده شد. ژن F و ناقل pUC18 توسط آنزيم هاي برشي XbaI و BamHI موردهضم مضاعف قرار گرفتند. محصولات هضم مضاعف توسط آنزيم DNA Ligase و T4 به هم متصل گرديدند و ناقل نوتركيب در باكتري E.coli ترانسفورم گرديد. از پرگنه هاي سفيد كه نشان دهنده نوتركيب بودن باكتري حامل آنها بود استخراج پلاسميد انجام گرفت و توسط هضم با آنزيم هاي برشي EcoRI و SacI و XbaI و BamHI وجود ژن در داخل پلاسميد تاييد گرديد. تكوين كلون باكتري حامل اين ژن منبعي پايدار جهت دسترسي به كلون فيوژن جهت بيان ژن در سيستم هاي مختلف از جمله انتقال به گياه مي باشد. |
| كليد واژه: ويروس بيماري نيوكاسل (NDV)، كلونينگ و ژن فيوژن (Fusion) |
 |
|
نسخه قابل چاپ |
