بانک مقالات زراعت و باغبانی

روبيسكو، آنزيم كليدي واكنش هاي تاريكي فتوسنتز در استروماي كلروپلاست است. زير واحد كوچك اين آنزيم که توسط ژنوم هسته کنترل مي شود، پس از بيان در سيتوپلاسم توسط پپتيد نشانه اختصاصي به كلروپلاست هدفمند مي گردد. به منظور به کارگيري اين ترادف نشانه در هدفمند کردن محصولات ديگر به داخل کلروپلاست، ابتدا DNA ژنومي از برگ گياه كلزا (.Brassica napus L) استخراج گرديد. تكثير ترادف نشانه مورد نظر با استفاده از واکنش زنجيره اي پليمراز و با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي مربوط به ژن کد کننده پپتيد نشانه انجام شد. قطعه تکثير شده به طول 170bp در پلاسميد عمومي 18 pUC و سپس در پلاسميد بياني گياه 121 pBI کلون شد. در مرحله بعد انتقال ژن به گياه توتون با استفاده از Agrobacterium tumefaciens سويه 4404 LBA انجام گرفت. انتخاب اوليه سلول هاي تراريخت گياه توتون بر روي محيط حاوي کانامايسين صورت پذيرفت. واکنش زنجيره اي پلي مراز با استفاده از آغازگر هاي اختصاصي و نيز رنگ آميزي برگ ها با محلول GUS تراريختي احتمالي گياهان را اثبات كرد. در عين حال، رنگ آميزي GUS بر روي كلروپلاست هاي جدا شده از گياهان تراريخت و مقايسه آن با كلروپلاست هاي گياهان شاهد نشان داد كه محصول ژن GUS به خوبي به كلروپلاستها هدفمند شده است. نتايج اين بررسي عملكرد عمومي ترادف نشانه زيرواحد كوچك روبيسكو گياه از كلزا را براي انتقال پروتئين هاي هترولوگ (نظير GUS) و در ميزبان هترولوگ (نظير توتون) نشان مي دهد.

 نسخه قابل چاپ