بانک مقالات زیست شناسی

قارچها يکي از عوامل مهم بيماريزا در گياهان زراعي مختلف مي باشند. يکي از راههاي کنترل بيماريهاي قارچي، محدود کردن رشد قارچها در ريزوسفر گياه مي باشد. از موثرترين روشهاي مورد استفاده مي توان از ژنهاي کيتينازي در گياه جهت توليد آنزيمهاي کيتينازي نام برد. اين آنزيمها، غالبا با فروپاشيدن اجزاي ساختاري قارچها، به مبارزه با اين عوامل بيماريزا مي پردازند. در ميان اجزاي ساختاري قارچ، ديواره قارچي، نخستين و مهم ترين سدي است كه در برابر اثر آنزيمهاي هيدرولازي قرار مي گيرد. از اين رو، بسياري از آنزيمهاي هيدرولازي بويژه آنزيمهاي کيتينازي، وظيفه اختصاصي از بين بردن اجزاي تشكيل دهنده ديواره قارچي را بر عهده مي گيرند. . باتوجه به اهميت ويژه آنزيم کيتيناز 42 کيلو دالتوني در اين فرآيند، و جهت بررسي تاثير اين آنزيم بر ديواره قارچهاي بيماريزا، خالص سازي آن ضروري مي باشد. در اين تحقيق 31 جدايه مختلف قارچ تريکودرما از نظر توليد آنزيمهاي کيتينازي در محيط کشت مايع CZ-DOX واجد کيتين با هم مقايسه شد. جدايهTrichoderma atroviride PTCC5220 با فعاليت ويژه آنزيمي U/mg 97/0 آنزيم کيتيناز بعنوان جدايه برتر انتخاب گرديد. جهت خالص سازي آنزيم کيتيناز 42 کيلو دالتوني (Chit42)، از کروماتوگرافي تعويض يوني در بستر CM-Sepharose Fast Flow وDEAE- Sepharose Fast Flow استفاده گرديد. نتايج مربوط به خالص سازي با استفاده از بستر CM-Sepharose نشان داد که آنزيم Chit42 همراه با سه پروتئين ديگر بصورت يک قله با فعاليت آنزيمي در ناحيه غلظت نمکي 5/0 تا 6/0 مولار و در ستون DEAE- Sepharose اين آنزيم در ناحيه غلظت نمکي 25/0 تا 35/0 مولار خالص مي گردد. نتايج حاصل از SDS-PAGE قله بدست آمده از ستون DEAE، وجود يک باند با وزن ملکولي حدود 42 کيلو دالتون را نشان مي دهد. بازده خالص سازي با استفاده از کرماتوگرافي تعويض يوني CM-Sepharose و DEAE بترتيب 2/41 و 8/61 برابر حالت غير خالص (در محيط کشت مايع) مي باشد.

 نسخه قابل چاپ