پاسخ به:بانک مقالات زیست شناسی
یک شنبه 31 اردیبهشت 1391 11:36 AM
| 5 : زيست شناسي ايران بهار 1388; 22(1):53-61. |
| كلون كردن ژن كيتيناز 42 (chit42) از جدايه Trichoderma atroviride PTCC5220 و مطالعه ساختار آن |
| رضانژاد حبيب رضا,زماني محمدرضا*,مطلبي مصطفي,حريقي محمدجواد |
| * تهران، پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري |
|
قارچ تريكودرما، به دليل ترشح انواعي از آنزيمهاي كيتينازي، بعنوان عاملي قوي در كنترل بيولوژيك بيماريهاي قارچي مورد استفاده قرار مي گيرد. اين آنزيمها، غالبا با فرو پاشيدن اجزاي ساختاري قارچها، به مبارزه با اين عوامل بيماريزا مي پردازند. در ميان اجزاي ساختاري قارچ، ديواره قارچي، نخستين و مهم ترين سدي است كه در برابر اثر آنزيمهاي هيدرولازي قرار مي گيرد. از اين رو، بسياري از آنزيمهاي هيدرولازي بويژه آنزيمهاي كيتينازي، وظيفه اختصاصي از بين بردن اجزاي تشكيل دهنده ديواره قارچي را بر عهده مي گيرند. از آنجا كه جدايه Trichoderma atroviride در ميان 30 جدايه مختلف قارچ تريكودرما جمع آوري شده در اين آزمايشگاه در سنجش فعاليت آنزيمهاي كيتينازي داراي بيشترين ميزان فعاليت آنزيمي مي باشد، بنابراين در اين تحقيق با توجه به اهميت آنزيم كيتيناز (42 كيلو دالتوني (Chit42 در فرآيند كنترل بيماري قارچي نسبت به كلون كردن ژن chit42 اين جدايه و مطالعه آن اقدام گرديد. جهت شناسايي ژن كيتيناز (chit42) 42، استخراج DNA ژنومي از جدايه قارچ T.atroviride به روش CTAB صورت گرفت. براي تكثير اين ژن از دو آغازگر اختصاصي (CUM1/CDM2) استفاده گرديد و قطعه مورد انتظار به طول تقريبي 1.6kb تكثير گرديد. آنزيم XhoI جهت بررسي الگوي هضم آنزيمي قطعه تكثير شده مورد استفاده قرار گرفت و صحت قطعه تكثير شده را مورد تاييد قرار داد. قطعه تكثير شده در ناقل pUC19 كلون شده و جهت تعيين توالي ژن مذكور مورد استفاده قرار گرفت. مقايسه توالي به دست آمده با تواليهاي ثبت شده در بانك ژن، ژن كلون شده chit42 را مورد تاييد قرار داده و پلاسميد حاصله بنام pMJH1 نامگذاري گرديد. بررسي توالي به دست آمده نشان داد كه طول اين ژن برابر 1573 bp بوده و داراي سه ناحيه اينتروني به طول 58bp، 62bp و 70bp مي باشد. مقايسه توالي نوكلئوتيدي كامل اين ژن با توالي ژن chit42 از ساير قارچها نشان داد كه طول اينترون هاي آنها حدودا برابر مي باشد. ضمنا تعداد اسيد آمينه هاي اين آنزيم برابر 421 اسيد آمينه مي باشد. مقايسه توالي اسيد آمينه آنزيم Chit42 به دست آمده در اين تحقيق با توالي گزارش شده مربوط به آنزيم Chit42 از قارچهاي T.aureoviride، T.viride، T.harzianum، T.longibrachiatum و T.koningii نشان داد كه ميزان مشابهت آنها به ترتيب برابر 100، 98، 98، 97 و 96 درصد مي باشد. |
| كليد واژه: Trichoderma atroviride؛ آنزيم كيتيناز 42، ژن chit42، كلونينگ، جداسازي ژن |
 |
|
نسخه قابل چاپ |
