پاسخ به:بانک مقالات زیست شناسی
یک شنبه 31 اردیبهشت 1391 11:35 AM
| 1 : زيست شناسي ايران بهار 1388; 22(1):1-11. |
| كلونينگ و بيان ژن آنزيم پني سيلين آسيلاز از باكتري Arthrobacter viscosus در Escherichia coli |
| ابراهيمي پور غلام حسين*,بمبئي بيژن,خدابنده مهوش,تركي نژاد فهيمه |
| * تهران، دانشگاه شهيد بهشتي، دانشكده علوم زيستي |
|
پني سيلين آسيلاز (پني سيلين آميداز يا (PAC; EC 3.5.1.11 آنزيمي كليدي است كه در توليد صنعتي آنتي بيوتيك هاي نيمه سنتتيك بتا لاكتام نقش دارد. اين آنزيم واكنش تبديلي پني سيلين G (بنزيل پني سيلين) را به 6-APA و PAA از طريق هيدروليز زنجير آسيل جانبي كاتاليز مي كند. نكته حايز اهميت در مورد اين آنزيم انجام واكنش به صورت دوطرفه با دو ويژگي هيدرولازي و ترنسفرازي است. اين تحقيق با هدف كلون و بيان ژن پني سيلين G آسيلاز از باكتري A.viscosus در E.coli به منظور رسيدن به افزايش سطح بيان انجام گرديد. پس از تكثير ژن pac از ژنوم A.viscosus، محصول PCR در وكتور بياني pET-26b(+) طوري كلون شد كه (6xHis tag) موجود در انتهاي MCS نيز بيان شود. بعد از تعيين توالي سكانس كلون شده، كلونهاي مثبت بر اساس ايجاد هاله در سلولهاي Serratia marcescens حساس به پني سيلين G غربال شد. به علاوه SDS-PAGE و وسترن بلات با آنتي بادي مونوكلونال عليه توالي شش هيستيدين انتهايي، پردازش اتوكاتاليتيكي را در سيتوپلاسم E.coli تاييد كرد. نتايج اين تحقيق، توانايي سويه ميزباني E.coli (BL21) را در بيان ژن pac متعلق به باكتري گرم مثبت نشان داد. به علاوه، نتايج نشان داد پروموتور T7 و القا آن بوسيله IPTG براي افزايش سطح بيان آنزيم پني سيلين آسيلاز متعلق به A.viscosus در ميزبان E.coli مناسب است. |
| كليد واژه: Arthrobacter viscosus، پني سيلين آسيلاز، بيان پروتئينهاي نوتركيب |
 |
|
نسخه قابل چاپ |
