پاسخ به:بانک مقالات زیست شناسی
یک شنبه 31 اردیبهشت 1391 10:45 AM
| 1 : زيست شناسي ايران 1389; 23(2):151-160. |
| طراحي و تهيه سازه حاوي ژن اينترفرون گاما و بيان آن در بذر گياه كلزا |
| باقري خديجه,جلالي جواران مختار*,مهبودي فريدون,معيني احمد,زبرجدي عليرضا |
| * تهران، دانشگاه تربيت مدرس، دانشکده کشاورزي ، گروه اصلاح نباتات |
| از مهمترين عوامل موثر بر افزايش ميزان توليد پروتئين نوترکيب در گياه، بيان آن در بافت مناسب و نيز افزايش پايداري و تجمع پروتئين با استفاده از عوامل هدف گيري كننده به جايگاههاي مناسب در سلول است. شبکه آندوپلاسمي به دليل حضور پروتئينهاي چپروني مختلف و ايزومرازها موجب بسته بندي صحيح پروتئينها شده و پايداري و تجمع پروتئين نوترکيب به ميزان قابل توجهي افزايش مي يابد. از طرف ديگر بيان پروتئين نوتركيب در بذر، موجب تجمع پايدار آن در غلظت نسبتا بالا در حجم كوچك و فشرده شده كه براي استخراج و ذخيره سازي بسيار مناسب مي باشد. در اين تحقيق براي بيان اينترفرون گاماي انساني در بذر گياه کلزا و قرار گرفتن آن در شبکه آندوپلاسمي از پيشبرنده اختصاصي بذر (Napin) و توالي KDEL در انتهاي کربوکسيلي ژن اينترفرون گاماي انساني استفاده شد. ژن اينترفرون گاما ابتدا در ناقل pGEM® - T Easy كلون و پس از تاييد صحت آن با استفاده از روش PCR، هضم آنزيمي و توالي يابي، قطعه موردنظر در ناقل بياني گياهي pBI121 ساب كلون گرديد. ناقل نوترکيبpBI IFN? با روش انجماد و ذوب به اگرباکتريوم سويه LBA4404 معرفي و اين باکتري براي تراريختي گياه کلزا از طريق ريزنمونه هاي کوتيلدوني مورد استفاده قرار گرفت. گزينش نوساقه هاي باززايي شده در محيط انتخابي حاوي آنتي بيوتيک (کانامايسين) انجام شد. آناليز گياهان تراريخت در سطح DNA با استفاده از PCR و در سطح پروتئين با استفاده از SDS - PAGE بيانگر انتقال موفقيت آميز ژن IFN? و بيان پروتئين بود. همچنين فعاليت پروتئين توليد شده با تست ELISA تاييد شد. |
| كليد واژه: پيشبرنده اختصاصي بذر (Napin)، توالي KDEL، پروتئين نوتركيب، اينترفرون گاماي انساني، كلزاي تراريخت |
 |
|
نسخه قابل چاپ |
