بانک مقالات زیست شناسی

تعداد بي شماري از پروتئين هاي نوترکيب وجود دارند که در شير بيان مي شوند. در اين راستا مي توان ژن مورد نظر را به منظور بيان در شير يک حيوان مزرعه اي تحت کنترل عناصر تنظيمي قرار داد. انتقال هسته با استفاده از سلولهاي ترانسفکت شده، ابزار کارآيي براي توليد حيوانات تراريخته است. در اين مطالعه به منظور توليد بز تراريخته با توانايي ترشح فاکتور IX انعقادي انساني نوترکيب (rhcfIX) در شير، سازه ژني(pBC1-hfIX)  با قرارگيري cDNA ژن مذکور بعد از پروموتور بتا- کازئين ساخته شد. سپس سلولهاي فيبروبلاست جنيني بز توسط pBC1-hfIX ترانسفکت شدند. سلولهاي فيبروبلاست از جنينهاي 35 تا 40 روزه بز تهيه گرديد. سپس کلونهاي مثبت (سلولهاي فيبروبلاست حاوي سازه ژني) انتخاب شده و توسط PCR تاييد شدند. به سلولهاي فيبروبلاست جنيني ترانسفکت شده اجازه داده شد که پس از رسيدن به مرحله تراکم سلولي، به مدت 72 ساعت در همان محيط DMEM حاوي 15 در صد سرم کشت شده تا در مرحله G0/G1 سيکل سلولي هم زمان شوند. تخمکهاي نابالغ از تخمدان هاي کشتارگاهي به دست آمدند و قبل از بي هسته سازي و انتقال هسته بالغ شدند. تخمکهاي بازسازي شده با سلولهاي دهنده، فيوژشده و فعال سازي آنها با استفاده از يونومايسين و 6DMAP انجام شد. جنينهاي بازسازي شده به پذيرنده هاي هم زمان شده منتقل شدند. 64 جنين حاصل از سلولهاي فيبروبلاست جنيني ترانسفکت شده به 12پذيرنده انتقال يافتند. در دو مورد از پذيرنده ها (16.6 درصد) بارداري در روز 42 توسط سونوگرافي تاييد شد. يکي از بارداريها منجر به تولد دو بزغاله سالم گرديد. حضور ژن فاکتور IX انعقادي انساني در بزغاله ها با استفاده از واکنش PCR وsequencing  تاييد گرديد. اين نتايج نشان مي دهد که سلولهاي فيبروبلاست جنيني بز حاوي ژن فاکتور IX مي توانند تکوين طبيعي جنين را پس از انتقال هسته تا مرحله ترم پيش برند. اين اولين تولد زنده حيوان تراريخته در ايران است.

 نسخه قابل چاپ